Ο πυρήνας του εργαστηριακού σχεδιασμού PCR:
1, διάταξη εργαστηρίου PCR
Το εργαστήριο δοκιμής ενίσχυσης PCR χωρίζεται σε τρεις ξεχωριστές περιοχές εργασίας κατ 'αρχήν: περιοχή αποθήκευσης και προετοιμασίας αντιδραστηρίου, περιοχή προετοιμασίας δειγμάτων, περιοχή ανάλυσης και ενίσχυσης προϊόντος. Προκειμένου να αποφευχθεί η διασταυρούμενη μόλυνση, η είσοδος σε κάθε χώρο εργασίας πρέπει να ακολουθεί αυστηρά μία μόνο κατεύθυνση, δηλαδή μόνο από την περιοχή αποθήκευσης και προετοιμασίας αντιδραστηρίων → την περιοχή προετοιμασίας δείγματος → την περιοχή ανάλυσης προϊόντος ενίσχυσης και ενίσχυσης. Η μεταφορά αντιδραστηρίων και δειγμάτων μεταξύ κάθε πειραματικής περιοχής πρέπει να πραγματοποιείται μέσω του παραθύρου μεταφοράς.
2. Σχεδιασμός εργαστηριακού κλιματισμού και εξαερισμού και έλεγχος πίεσης
Το εργαστήριο PCR δεν έχει αυστηρές απαιτήσεις επιπέδου καθαρισμού, αλλά για να αποφευχθεί η πιθανότητα διασταυρούμενης μόλυνσης μεταξύ διαφόρων πειραματικών περιοχών, συνιστάται να υιοθετηθεί μια μορφή οργάνωσης πλήρους παράδοσης και πλήρους εξαγωγής αέρα. Ταυτόχρονα, ο λόγος παροχής αέρα και καυσαερίων πρέπει να ελέγχεται αυστηρά για να διασφαλιστεί η απαίτηση πίεσης κάθε πειραματικής περιοχής.
(1) Χώρος αποθήκευσης και προετοιμασίας αντιδραστηρίων
Οι κύριες λειτουργίες σε αυτήν την πειραματική περιοχή είναι η παρασκευή αντιδραστηρίων αποθήκευσης, η διανομή αντιδραστηρίων και η παρασκευή του κύριου μείγματος αντίδρασης. Τα αντιδραστήρια και τα υλικά που χρησιμοποιούνται για την προετοιμασία του δείγματος πρέπει να μεταφέρονται απευθείας σε αυτήν την περιοχή και όχι μέσω άλλων περιοχών. Οι πρώτες ύλες του αντιδραστηρίου πρέπει να αποθηκεύονται σε αυτήν τη ζώνη και να προετοιμάζονται στα απαιτούμενα αντιδραστήρια αποθήκευσης σε αυτήν τη ζώνη. Για τον έλεγχο της πίεσης ροής αέρα, αυτή η περιοχή θα πρέπει να διατηρεί μια ελαφρώς θετική πίεση έξω.
(2) Περιοχή προετοιμασίας δείγματος
Οι κύριες λειτουργίες σε αυτήν την περιοχή είναι η συντήρηση δειγμάτων, η εκχύλιση νουκλεϊκού οξέος (RNA, DNA), η αποθήκευση και η προσθήκη στο σωλήνα αντίδρασης ενίσχυσης και η μέτρηση της σύνθεσης DNA. Η κλίση πίεσης σε αυτήν την περιοχή πρέπει να είναι θετική πίεση σε σχέση με την παρακείμενη περιοχή για να αποφευχθεί η είσοδος ρύπανσης αερολύματος στην περιοχή από την παρακείμενη περιοχή. Επιπλέον, δεδομένου ότι ενδέχεται να προκληθεί μόλυνση από αεροζόλ κατά τη διάρκεια των εργασιών φόρτωσης δείγματος, θα πρέπει να αποφεύγεται η περιττή πεζοπορία σε αυτήν την περιοχή.
(3) Περιοχή ανάλυσης προϊόντων ενίσχυσης και ενίσχυσης
Οι κύριες λειτουργίες σε αυτόν τον τομέα είναι η ενίσχυση DNA και ο προσδιορισμός των ενισχυμένων θραυσμάτων. Επιπλέον, η προσθήκη του παρασκευασμένου προτύπου DNA (από την περιοχή παρασκευής δείγματος) και η παρασκευή του κύριου μίγματος αντίδρασης (από την περιοχή αποθήκευσης αντιδραστηρίου και του παρασκευάσματος) σε ένα μείγμα αντίδρασης μπορεί επίσης να πραγματοποιηθεί σε αυτήν την περιοχή. Οι απαιτήσεις διαβάθμισης πίεσης σε αυτήν την περιοχή είναι: αρνητική πίεση σε σχέση με την παρακείμενη περιοχή για την αποφυγή διαρροής αερολύματος από αυτήν την περιοχή. Για να αποφευχθεί η ρύπανση που προκαλείται από τα αερολύματα, θα πρέπει να ελαχιστοποιηθεί το περιττό περπάτημα στην περιοχή. Μεμονωμένες λειτουργίες όπως η προσθήκη δειγμάτων πρέπει να πραγματοποιούνται σε πάγκο εξαιρετικά καθαρού.
3. Πρόληψη και έλεγχος της ρύπανσης
Το βασικό ζήτημα του εργαστηριακού σχεδιασμού PCR είναι ο τρόπος αποφυγής μόλυνσης. Στην πραγματική εργασία, οι ακόλουθοι τύποι ρύπανσης είναι συνηθισμένοι: μόλυνση των ενισχυμένων προϊόντων. μόλυνση του φυσικού γονιδιωματικού DNA · μόλυνση αντιδραστηρίων και μόλυνση μεταξύ δειγμάτων. Επειδή μόλις προκύψει ρύπανση, το πείραμα πρέπει να διακοπεί έως ότου βρεθεί η πηγή της ρύπανσης και το αποτέλεσμα του πειράματος πρέπει να ακυρωθεί και το πείραμα πρέπει να επαναληφθεί. Επομένως, είναι χρονοβόρο και κουραστικό να βρούμε την πηγή ρύπανσης γύρω από το εργαστήριο μετά την εμφάνιση της ρύπανσης και να σπαταλήσουμε ανθρώπινο δυναμικό και υλικούς πόρους. Επομένως, για να αποφευχθεί η ρύπανση, η πρώτη προτεραιότητα πρέπει να είναι η πρόληψη και όχι η εξάλειψη.
(1) Αυστηρή κατανομή του χώρου εργασίας
Η ρύθμιση κάθε πειραματικής περιοχής είναι λογική. κάθε πειραματική περιοχή θα πρέπει να έχει προφανείς ενδείξεις (όπως εντυπωσιακός αριθμός σπιτιού ή διαφορετικό χρώμα εδάφους, κ.λπ.) για την αποφυγή σύγχυσης του εξοπλισμού και των αντιδραστηρίων σε διαφορετικές πειραματικές περιοχές.
(2) Λογικές ρυθμίσεις συστήματος
Εύλογες ρυθμίσεις συστήματος κλιματισμού και εξαερισμού, προσπαθήστε να χρησιμοποιήσετε συστήματα κλιματισμού πλήρους παράδοσης και εξάτμισης. αυστηρός έλεγχος πίεσης ροής αέρα για να εξασφαλιστούν διαφορετικές απαιτήσεις πίεσης σε διαφορετικές πειραματικές περιοχές.
(3) Τυπική λειτουργία
Οι τεχνικοί του εργαστηρίου δοκιμών ενίσχυσης πρέπει να υποβληθούν σε πρακτική εξάσκηση, και μόνο αφού αποκτήσουν τα προσόντα μπορούν να συμμετάσχουν σε κλινικές δοκιμές ενίσχυσης γονιδίων. κατά τη διάρκεια της πειραματικής λειτουργίας, ο χειριστής πρέπει να φορά γάντια και να τα αλλάζει συχνά. Επιπλέον, η χρήση καλυμμάτων μίας χρήσης στη λειτουργία είναι επίσης ένα αποτελεσματικό μέτρο για την πρόληψη της ρύπανσης. η εργασία καθαρισμού είναι έγκαιρη και σωστή. Αφού τελειώσει η πειραματική εργασία, η περιοχή πρέπει να καθαριστεί αμέσως. Εκτός από το συμβατικό υγρό απολύμανσης για να σκουπίσετε και να απολυμάνετε την επιφάνεια ή την απολύμανση ακτινοβολίας υπεριώδους φωτός, κάποιος πειραματικός εξοπλισμός θα πρέπει επίσης να είναι αυτόκλειστο.
(4) Αυστηρή διαχείριση
Ελέγξτε αυστηρά το προσωπικό που εισέρχεται και εξέρχεται από το εργαστήριο. Το προσωπικό που δεν έχει καμία σχέση με το πείραμα δεν επιτρέπεται να εισέλθει και να εγκαταλείψει το εργαστήριο κατά βούληση. Εάν είναι δυνατόν, δημιουργήστε ανεξάρτητα περάσματα και πόρτες για είσοδο και έξοδο από ολόκληρη την πειραματική περιοχή. ελαχιστοποιήστε το περιττό περπάτημα στην πειραματική περιοχή για να μειώσετε την πιθανότητα διασταυρούμενης μόλυνσης. προϊόντα ενίσχυσης Η περιοχή ανάλυσης είναι η κύρια πηγή μόλυνσης των ενισχυμένων προϊόντων. Το απόβλητο υγρό δεν μπορεί να απορριφθεί στο εργαστήριο. Πρέπει να εμποτιστεί και να απολυμανθεί σε απολυμαντικό και να απορριφθεί μακριά από το εργαστήριο. Τα υλικά μιας χρήσης, όπως οι χρησιμοποιημένες άκρες, πρέπει επίσης να απολυμανθούν. Μετά το μούλιασμα και την απολύμανση, ομοιόμορφη επεξεργασία, όπως αποτέφρωση κ.λπ. Η περιοχή ανάλυσης του προϊόντος ενίσχυσης μπορεί να χρησιμοποιεί ορισμένες γενετικές μεταλλάξεις και τοξικές ουσίες και πρέπει να δοθεί ιδιαίτερη προσοχή στην προστασία του προσωπικού του πειράματος.
(5) Πλήρεις εργαστηριακές υποστηρικτικές εγκαταστάσεις
Απαιτούνται πλήρεις εργαστηριακές εγκαταστάσεις για την εξασφάλιση της πειραματικής εργασίας. Ο αντίστοιχος εξοπλισμός και τα όργανα πρέπει να είναι εξοπλισμένα σύμφωνα με τα διαφορετικά πειραματικά περιεχόμενα κάθε εργαστηρίου, όπως πάγκοι εξαιρετικά καθαροί, φυγοκεντρικοί, δειγματοληπτικές συσκευές κ.λπ.